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T4 DNA聚合酶 (Exo-)說明書

更新時間:2023-10-24      點擊次數(shù):447

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產(chǎn)品詳情

T4 DNA聚合酶是來源于T4噬菌體的DNA聚合酶,又名T4 gp43,分子量為104kDa,在T4噬菌體DNA復(fù)制中負責(zé)先導(dǎo)鏈和滯后鏈5’→3’方向的脫氧核糖核酸合成。T4 DNA polymerase的聚合酶活性強于DNA 聚合酶 I,不具有 5'-3' 核酸外切酶活性。本T4 DNA polymerase(exo-)為通過點突變D219A改造,使其3'-5' 外切核酸酶活性大大降低,但保留了完整的聚合酶活性。

本公司T4 DNA polymerase 是重組表達,并經(jīng)多步純化制備的重組蛋白。

特點

? 無鏈置換活性

? 5’-3’外切酶活性,不能進行切口平移

? 3’-5’外切酶活性大大地降低

? 熱失活:75°C for 20 min

濃度

5U/μl

活性定義

一個活力單位即在37℃條件下,30分鐘內(nèi)催化10 nmol dNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量。

活性測定條件

1×T4 DNA polymerase (exo-)Buffer20 mM Tris-HCl50 mM NaCl,10 mM MgCl2,0.5mM DTT,0.1mg/ml BSA (pH 7.9 @ 25°C),37℃溫育

酶貯存緩沖液

     20 mM Tris-HCl,200 mM NaCl,10 mM MgCl2,5mM DTT,50% GlycerolpH 7.5。

產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成

Component

78DC10062-200U

78DC10062-1000U

T4 DNA polymerase(exo-)

200U

1000U

10×T4 DNA polymerase (exo-)Buffer

0.5ml

1.5ml

0.1% BSA1mg/ml

0.5ml

1.5ml







適用范圍

? 縫隙填充(無缺口平移活性)

? 去除3’突出單鏈或補平5’突出單鏈,形成平末端

? 生成無縫克隆中的5突出端,實現(xiàn)基因和載體的互補配對

應(yīng)用舉例

1.補平5’突出單鏈,形成平末端

1按下表配制反應(yīng)體系

反應(yīng)組分

ul

10× Buffer

2

2mM dNTP

2

底物:3’突出或5’突出DNA

100ng-1µg

T4 DNA polymerase (5U/µl)

1

0.1%BSA

2

H2O


總體積

20













2) 37×30min反應(yīng),

375×15min失活酶

按需進行后續(xù)實驗。

質(zhì)量控制

經(jīng)過嚴格的質(zhì)控檢測,確保該產(chǎn)品具有最高的活性和純度。

運輸與保存

-20℃可保存2年,避免反復(fù)凍融。

注意事項

l 適用于凹陷單鏈區(qū)聚合補平反應(yīng)(聚合酶反應(yīng))的緩沖液包括:AM Buffer A-D、A1-D1T4 DNA連接酶反應(yīng)緩沖液。

l 鑒于AM Buffer B2是此酶最youBuffer,當(dāng)使用包含BSA的緩沖時,建議補充BSA。

l Activity in AM BuffersAM Buffer A: 60% AM Buffer B、C、D: 100%。

l 離子強度超過100 mM時活性將被抑制,SH基的還原劑促進活性。

l 活性易受模板DNA高級結(jié)構(gòu)影響,T4 gene 32(T4 SSB)蛋白可以顯著提高聚合酶活性。



貨號品名規(guī)格品牌
78DC10062-200UT4 DNA聚合酶 (Exo-)200UBIOHUB
78DC10062-1000UT4 DNA聚合酶 (Exo-)1000UBIOHUB






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